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                      液氮罐超低溫保存方法詳述

                      時間:2018-10-21 08:36:43 來源: 作者:admin
                            微生物都可以用超低溫來保管, 超低溫保管法是適用范圍廣泛的微生物保管法。 需求雜亂養分的微生物種, 如用其他的儲存辦法不能堅持其生機 (如 植物的病原性真菌) ,一般可用超低溫的辦法保管( ATCC1983;Halliday , Baker1985) 。


                            此法是將凍存在小管或安瓿里的細胞以較慢的冷凍速率(1℃/分 鐘)冷凍,直至—150℃,再將這些小管儲存在—150~-196℃的液氮中。 超低溫的冷凍保護劑不同于凍干法所用的冷凍劑。ATCC 常用一種由甘油 (10%) 、二甲亞砜(5%)和培養液制成的混合劑保管大都的細胞株。



                      液氮罐超低溫保存方法詳述
                       
                            這些化學 試劑進入細胞內可防止內膜的冷凍損傷。 儲存在低溫容器內的細胞復蘇時有必要當心操作。當小管被加熱時,所構成的 冰晶會將細胞殺死, 正確操作就可防止這種事端。只需敏捷將樣品凍結就能削減 生機的丟掉,做法是:將封口的小管敏捷放入 37℃的水中,直至一切的冰消融, 然后翻開管口,將內容物移入培養基。 超低溫保藏的微生物有必要一直儲存在溫度十分低的環境中,因而需求液氮 罐。在長時間儲存的過程中有必要常常注意彌補液氮。

                        這種儲存辦法比凍干法需求更 多的經費,包含為了保持儲存溫度所必要的勞動力和液氮等。

                      1 資料 病毒超低溫保管所需資料有:熱收縮塑料管(NuncCryoflex) ,液氮罐,防 護手套和面罩,記號筆,氣體噴燈,裝液氮的保溫瓶。

                      2 辦法
                      (1)剪一段兩頭各超出冷凍管長度 2cm 的熱收縮塑料管。
                      (2)將富含弄清病毒懸液(安排培養的上清培養基,或安排培養基內的細 胞溶解產品均可)冰浴幾分鐘,用滅菌移液管將 0.2ml 冰浴過的上清懸液分裝到 冷凍管內,并將蓋子擰緊。
                      (3)將有病毒的冷凍管放入熱收縮塑料管中部,刺進正確的標簽。
                      (4)用噴燈當心加熱熱收縮塑料管,并使之包住冷凍管。注意不要用太高 的溫度加熱熱收縮塑料管。
                      (5)再當心加熱熱收縮塑料管的兩頭,用大號鑷子夾緊管的端口至徹底密 封。
                      (6)將密封好的冷凍管疾速在裝有液氮的保溫瓶中冷凍(操作時需求戴面 罩和手套) 。
                      (7)將冷凍過的冷凍管放入液氮罐中的格子內,一起記載樣品的具體的存 放方位、試驗編號和寄存日期等。
                      (8)需求用時,敏捷從液氮罐內取出所需樣品,并投入 37℃水浴箱中凍結 后,用解剖刀片在冷凍管的硅化墊圈處切開熱收縮塑料管。擰開冷凍管的蓋子時 不需求除掉熱收縮塑料管。 



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